Single Gene qPCR Primer Set
개요
Single Gene qPCR Primer Set는 MIQE guideline*에 따른 필수 조건을 만족하는지 확인하기 위한 검증 실험을 수행 후 primer set를 제공 드리는 서비스로 별도 검증 없이 간편하게 실험에 사용 가능하여 primer optimization에 소요되는 시간을 절감할 수 있습니다. (Table 참고)
*MIQE Guideline 란?
MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-time PCR Experiments) Guideline* 는 qPCR 실험의 신뢰도와 정확도, 재현성 등을 판단 및 평가할 수 있도록 실험 전 과정에 거친 단계별 checklist를 제시한 qPCR 실험의 지침 기준입니다. 해당 서비스는 실험 정보를 고객분께 제공하며 이를 통하여 결과의 유효성을 평가할 수 있습니다.
Table. MIQE guideline의 qPCR validation 항목 중 필수 정보
| Item to check |
| Specificity (gel, sequence, melt, or digest) |
| For dsDNA binding dyes, Cq of the NTC |
| Calibration curves with slope and y intercept |
| PCR efficiency calculated from slope |
| r2 of calibration curve |
| Linear dynamic range |
| Cq variation at LOD |
| Evidence for LOD |
The MIQE Guidelines [Bustin, S.A., et al. 2009. The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments, Clinical Chemistry 55:4, 611-622]
특장점
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Primer blast 및 자사 bioinformatics tool을 이용한 표적 특이적 primer 디자인
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Self primer-dimer 형성 서열 배제
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Dissociation curve에서 단일 peak 확인
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Gel 전기영동에서 단일밴드 확인
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70 ~ 150 bp의 짧은 amplicon size
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102 ~ 107 copies의 광범위한 증폭 범위
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MIQE Guideline을 준수하는 90 ~ 110%의 qPCR 증폭 효율
응용 및 적용
• Applicable to Quantitative Real-time PCR
실험 자료
Figure. Human ACTB의 target과 NTC(No-template control)의 Dissociation curve, Dynamic range, standard curve, 그리고 전기 영동 이미지.
* Single Gene qPCR Primer Set는 Exicycler™ 96 V3와 2X GreenStar™ qPCR Master Mix (-ROX Dye)(K-6253)로 검증됩니다. 때문에 타사 제품을 이용할 경우 결과에 차이가 있을 수 있습니다.
