Template DNA는 공통적으로 아래 그림과 같이 T7 promoter, RBS, His-tag과 T7 terminator의 구조를 가지고 있어야 합니다. His-tag을 붙이는 위치에 따라 2 종류로 제작을 하여 발현과 folding, 분리정제가 잘 되는 것을 선택할 수 있습니다. 이때에 template 형태는 plasmid DNA와 PCR product 두가지 중 선택할 수 있습니다. PCR product로 준비할 경우 빠르게 여러 종류의 template를 준비할 수 있는 장점이 있지만, 단백질 합성수율이 plasmid DNA에 비해 약간 떨어질 수도 있습니다. 특히 대량발현을 위해 장시간 반응시키는 SECF 방식을 사용할 경우 template의 안정성이 중요하므로 plasmid template를 권장합니다.
1) Plasmid DNA를 template로 사용할 경우, in vitro translation 전용 vector인 pBIVT vector (Cat. No. K-7350, Bioneer) 에 클로닝하여 사용하는 것을 추천 드립니다. 그 외에도 T7 system과 RBS, 정제 목적의 His-tag을 갖춘 발현 vector도 사용할 수 있습니다. 클로닝된 plasmid DNA는 AccuPrep® Nano-Plus Plasmid Mini Extraction Kit (Cat. No. K-3112, Bioneer)를 사용하면 10분 내에 고순도, 고농도의 plasmid DNA가 추출이 되어 편리하게 준비할 수 있습니다.
2) PCR product를 template로 사용할 경우, ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit (Cat. No. K-7400, Bioneer)를 사용하면 목적 유전자를 PCR로 증폭하여 클로닝 과정 없이 많은 수의 template를 손쉽게 준비할 수 있습니다. 준비된 template DNA의 순도는 A260/280 ratio가 1.8 - 2.0 범위에 있는 것을 사용해야 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.
Table. Related Products
Plasmid |
Plasmid template generation by cloning |
| 1) pBIVT Vector (Cat. No. K-7350) |
| 2) pBT-7 vector (Gene synthesis service) |
| 3) Other vector may also be used. (ex. pIVEX, pK7, pET vector series) |
PCR product |
Linear template generation by PCR |
| 1) ExiProgen™ ProXpress PCR Template kit (Cat. No. K-7400) |
| 2) ExiProgen™ Protein Expression Optimization Kit (Cat. No. K-7410) |
