AccuRapid™ Cloning Kit

Bioneer의 AccuRapid™ Cloning Kit는 1~3 조각의 insert (PCR product)를 선형화된 vector에 정확하고 신속하게 cloning 할 수 있는 제품입니다. 본 제품은 PCR로 증폭된 insert 말단과 선형화된 vector 양말단의 18 ~ 21 bp complementary sequence를 인식하여 연결하는 방법입니다. Insert (PCR product 또는 plasmid)에 제한효소를 처리한 후 ligation하는 방법과 달리, 제한효소 처리 대신에 cloning 하려는 insert를 PCR 증폭을 통해 빠르게 준비할 수 있으며, vector에 insert를 원하는 방향으로 정확히 cloning 할 수 있습니다. (당사의 세계 최고속 PCR장비, ramping rate 9.5℃/sec, AllInOneCycler™ 를 사용하면 매우 빠르게 증폭할 수 있습니다)

As low as ₩165,000

카탈로그 번호

제품 개요

특장점

빠르고 정확한 cloning
30분 반응으로 빠르고 정확한 cloning
Insert에 제한효소를 처리하지 않고 vector에 원하는 방향으로 cloning 가능
Vector 양 말단의 18 ~ 21 bp complementary sequence 포함한 primer 를 이용하여 insert를 증폭한 후 vector에 원하는 방향으로 cloning
다양한 크기의 여러 개 insert를 동시에 cloning
여러 조각 (1~3 조각) 의 insert를 각 조각의 양 말단 complementary sequence를 이용하여 원하는 순서로 동시에 cloning 가능
손쉽게 원하는 형태로 vector 조작 가능
손쉽게 cloning 디자인을 다양화하여 원하는 형태로 vector 조작 가능

Schematic protocol for AccuRapid ™ Cloning Kit

응용 및 적용

• Multiple fragment cloning

• Gene synthesis

• Gene cloning

• Mutagenesis

• Vector modification

• Fusion protein

제품 규격/사양

▶ Kit 구성

AccuRapid ™ Cloning Kit Components	K-7110 (10 rxns)	K-7120 (10 rxns x 2)	K-7130 (10 rxns x 5)
AccuRapid ™ Enzyme Mix	45 ul	45 ul x 2 ea	45 ul x 5 ea
2 kb pBHA Control Vector (25 ng/ul)	3 ul	3 ul x 2 ea	3 ul x 5 ea
750 bp Control Insert (50 ng/ul)	5 ul	5 ul x 2 ea	5 ul x 5 ea

▶ 실험 방법

1선형화된 vector 준비
AccuRapid ™ Cloning Kit를 사용하기 위해서는 제한효소 처리 또는 PCR을 이용하여 vector를 완벽히 선형화하는 것이 중요합니다.
완벽히 선형화된 vector로 실험을 진행해야 cloning 효율이 높아져, insert가 삽입되지 않은 원형 vector의 colony 형성은 줄어들고 insert가 삽입된 colony가 많이 형성됩니다.
* 클로닝 효율을 높이기 위해 제한효소 처리 후 전기영동을 통해 선형화된 vector 를 확인하고 다음 실험으로 진행하는 것을 권장합니다.

2Primer 디자인
Insert를 증폭하기 위한 primer는 선형화된 vector 양 말단의 18 ~ 21 bp complementary sequence를 포함하도록 디자인되어야 합니다.

3Insert 증폭
디자인 후 합성된 extension primer로 PCR을 수행하여 insert를 증폭합니다. (당사의 세계 최고속 PCR장비, AllInOneCycler™ 를 사용하면 매우 빠르게 증폭할 수 있습니다.) 그리고 PCR purification 또는 전기영동 후 gel purification (AccuPrep^® PCR/Gel Purification Kit, K-3037)을 수행하여 purified insert를 확보합니다.

4Cloning 반응
Cloning 반응을 위해 다음과 같이 반응물을 혼합하여 spin down 후 incubator 또는 PCR machine을 사용하여 50°C에서 30 분 동안 반응시킵니다. 반응이 끝나면 transformation을 수행할 때까지 얼음 또는 -20℃에 보관합니다.

Reaction mixture	Positive control	Negative control	1 ~ 3 Insert fragment
Linearized Vector (25 ~ 50 ng/μl)	1 μl of 2 kb pBHA Control Vector	y μl (25–50 ng vector)	y μl (25–50 ng vector)
Purified PCR Fragment	1.5 μl of 750 bp Control Insert	0 μl	x μl* (70–150 ng Insert)
D.W.	3.5 μl	6 μl – y ul	6 - y – x μl
AccuRapid ™ Enzyme Mix	4 μl
Total	10 μl
반응	50°C, 30 min

* Purified PCR Fragment는 총 70~150 ng이 되도록 넣어줍니다. 농도에 따라 넣어주는 양이 달라질 수 있으나, 최대 6 - y μl까지 가능합니다.
ex) y = 1일 경우, 1 fragment: 5 μl, 2 fragments: 각 2.5 μl x 2, 3 fragments: 각 1.7 μl x 3

5Transformation

◈ Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.

• ISO 9001 – certificate

주문 정보

카탈로그 번호	제품명	규격	가격
K-7110	AccuRapid ™ Cloning Kit	10 rxns	₩K-7110
K-7120		20 rxns	₩K-7120
K-7130		50 rxns	₩K-7130

프라이머 설계

▶ Primer 설계

AccuRapid ™ Cloning Kit를 사용하기 위해 insert는 증폭 하여야 하며, 사용되는 extension primer는 primer의 5’ end에 선형화된 vector 양 말단의 18 ~ 21 bp complementary sequence를 포함하도록 디자인되어야 합니다.

ex) NdeI(CATATG), XhoI(CTCGAG) enzyme site 로 cloning 하는 경우

*표시는 필수 입력 항목입니다.

3’ end vector sequence (Forward primer)*	*18 ~ 21bp의 서열을 입력해 주십시요. 입력한 서열은 primer design 에 반영됩니다.
5’ end vector sequence (Reverse primer)*	*18 ~ 21bp의 서열을 입력해 주십시요. 입력한 서열은 primer design 에 반영됩니다.
Insert sequence1*
Insert sequence2
Insert sequence3

*버튼을 클릭하시면 결과가 아래에 표시됩니다.

Name	Sequence	bp
Insert-1_FP
Insert-1_RP
Insert-2_FP
Insert-2_RP
Insert-3_FP
Insert-3_RP

AccuRapid™ Cloning Kit

특장점

응용 및 적용

▶ Kit 구성

▶ 실험 방법

◈ Manual

◈ MSDS

◈ Flyer

◈ Quality Assurance

▶ Primer 설계