AccuPower® DualStar™ qPCR PreMix

개요

(a) Zero cycle에서 PCR 반응 억제
PCR mixture 제조 후, pre-denaturation 온도에 도달하기 전에 비특이적 반응물이 생성되는 것을 방지하기 위해 PPi를 이용합니다.
DNA polymerase가 활성을 갖기 위해서는 Mg²⁺ 이온이 필요한데, mixture에 첨가되어 있는 PPi는 Mg²⁺ 이온과 높은 친화력을 갖기 때문에 Mg²⁺ 이온을 붙잡아 둠으로써 PCR 반응을 억제합니다.

(b) 변성 (Denaturation)
Mixture에 첨가되어 있는 PPase는 denaturation 단계에서 반응 온도가 올라가면 활성화되어 PPi를 Pi로 분해하여 Mg²⁺ 이온을 해리 시킵니다.
해리된 Mg²⁺ 이온은 DNA polymerase에 결합하여 PCR 반응을 진행할 수 있도록 enzyme을 활성화 합니다.

(c) 풀림(Annealing) & 증폭(Extension)
활성화된 DNA polymerase는 PCR cycle이 진행됨에 따라 target DNA를 증폭합니다.

특장점

특이성
PyroHotStart 기술을 적용하여 비특이 증폭산물 생성을 최소화하고, PCR 반응 효율을 극대화 함으로써 미량의 template DNA를 효과적으로 증폭할 수 있습니다. PyroHotStart 기술은 pyrophosphate와 pyrophosphatase 효소를 이용하여, PCR 반응을 시작하기 전 (zero cycle)에 발생하는 비특이적 반응을 줄여 특이도를 높인 바이오니아 고유의 특허기술입니다. 뿐만 아니라 매 증폭 cycle시 발생하여 PCR 저해물질로 작용하는 PPi를 제거함으로써 반응 효율을 높입니다.
장비 호환성
여러 종류의 Real-time PCR 장비에 대해 최적화된 결과를 얻을 수 있습니다.
다양한 시료
DNA, cDNA와 high GC template 등 유전자의 종류에 상관없이 유효한 정량 PCR 결과를 얻을 수 있습니다.
편리성
각 tube에 DNA polymerase와 Real-Time PCR 수행에 필요한 모든 구성 성분이 포함되어 있어, template DNA, target 유전자에 대한 probe & primer, D.W.만 넣어 반응을 수행할 수 있습니다.
안정성
PCR 반응 혼합물에 안정화제를 첨가하여, -20℃에서 2년까지 효소 활성이 안정적으로 유지됩니다.
재현성
ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.

응용 및 적용

• Gene expression profiling

• Target DNA quantification

• Microbial detection

• Viral/bacterial pathogen load determination

• Evaluation of primer pair performance for probe-based Real-Time PCR

실험 자료

Figure. Real-Time PCR Data of AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix

AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix provides at least 7 orders of magnitude in dynamic range (10⁷ ~ 10¹ copies/reaction).

(A) : Amplification curve. West Nile Virus (WNV) primers and TaqMan-based probe were added into AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix.
A series of WNV positive control diluents were tested.
(B) : Standard curve. All data were obtained using Exicycler™ 96 Real-Time Quantitative Thermal Block (Bioneer Co.).

제품 규격/사양

▶ 제품 규격/사양

5' to 3' exonuclease	Yes
3' to 5' exonuclease	No
3' – A Overhang	Yes
Fragment size	-

▶ 실험 자료

Figure 1. Data using Various kinds of Real-Time PCR Instruments

AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix provides at least 7 orders of magnitude in dynamic range (10⁷ ~ 10¹ copies/reaction).

(A) : Amplification curve and standard curve using ABI 7500 Fast Real-Time PCR machine (Applied Biosystems Co.). A series of WNV positive control diluents were tested.
(B) : Amplification curve and standard curve using ABI 7500 Real-Time PCR machine (Applied Biosystems Co.).
(C) : Amplification curve and standard curve using Opticon Real-Time PCR machine (MJ Research, currently Bio-Rad Inc.).

Figure 2. Comparison of detection sensitivity between AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix and other supplier's master mixture

West Nile Virus (WNV) primers and TaqMan-based probe were added into AccuPower^® Dualstar™ qPCR PreMix and other supplier's master mixture. A series of WNV positive control diluents were tested. Reaction mixtures were prepared and qPCR was performed according to each supplier's protocol. All data were obtained using ABI 7500 Fast Real-Time PCR machine (Applied Biosystems co.).

◈ Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.

• ISO 9001 - certificate

• ISO 13485 - certificate

주문 정보

카탈로그 번호	제품명	규격					가격
K-6100	AccuPower^® DualStar™ qPCR PreMix	Exicycler	8-well strip	20 µl	optical film included	96 rxn	₩K-6100
K-6110			8-well strip	50 µl		96 rxn	₩K-6110
K-6103			96-well plate	20 µl		96 rxn	₩K-6103
K-6113			96-well plate	50 µl		96 rxn	₩K-6113
K-6101		ABI 7500	8-well strip	20 µl	optical film included	96 rxn	₩K-6101
K-6111			8-well strip	50 µl		96 rxn	₩K-6111
K-6104			96-well plate	20 µl		96 rxn	₩K-6104
K-6114			96-well plate	50 µl		96 rxn	₩K-6114
K-6102		CFX96	8-well strip	20 µl	optical film included	96 rxn	₩K-6102
K-6112		CFX96	8-well strip	50 µl	optical film included	96 rxn	₩K-6112

자주 묻는 질문들

PreMix와 Master Mix 제품의 차이점은 무엇인가요?

PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.

PreMix의 사용법/ PreMix 시약 볼륨은 어떻게 맞추면 되나요?

건조된 시약의 부피는 고려하지 않아도 되며, template, primer, nuclease-free water만으로 최종 reaction volume을 맞춰주면 됩니다.

Master Mix의 사용법

2X Master Mix로 제공되며 최종 reaction volume의 1/2 만큼 사용하면 됩니다. 반응수(tests)는 reaction volume을 얼마로 사용하는지에 따라서 달라집니다.

PreMix제품의 반응수(tests)와 제공량(volume)

PreMix는 96 tests와 480 tests 제품이 있으며, 제품에 따라 20 μl, 50 μl reaction volume으로 판매되고 있습니다.

Real-Time PCR 시약의 타사 장비와의 호환성 문의

ABI (Thermo Fisher Scientific), CFX (Bio-Rad)에 호환되는 tube에 진공 건조되어 PreMix type으로 제공하고 있습니다.

RT-qPCR 실험 시 장비에 따른 Rox dye 사용유무

Exicycler™ (BIONEER), CFX (Bio-Rad), LightCycler^® (Roche)는 ROX dye를 사용할 필요가 없습니다. 반면, 그 외의 장비에는 대부분 ROX dye를 사용해야 합니다. 제품 구매 시 장비 확인이 반드시 필요합니다.

제품의 유효기간 확인 방법

일반적으로 PreMix의 유효기간은 -20°C 조건에서 2년, Master Mix의 유효기간은 1년 정도이며, 제품상자의 모래시계 옆 사용기한이 표시되어 있습니다.

COA 요청

qc@bioneer.co.kr 메일로 구매하신 제품의 Cat. No.와 Lot. No.를 기재하여 보내주시면 메일로 회신해드립니다.

One step RT-qPCR제품 종류를 알고 싶습니다.

진행하고자 하는 qPCR방식에 따라 크게 두 분류로 나눌 수 있습니다.

Hydrolysis probe 방식: AccuPower^®Dual-HotStart™ RT-qPCR PreMix & Master Mix
Intercalating dye 방식: AccuPower^®GreenStar™ RT-qPCR PreMix & Master Mix

DualStar™ 제품과 GreenStar™ 제품의 차이점은 무엇인가요?

형광물질 포함 여부의 차이입니다. DualStar™제품은 hydrolysis probe 방식(ex. TaqMan^® Assay)으로 형광물질이 포함되어 있지 않으며, GreenStar™제품은 intercalating dye 방식으로 형광물질이 포함되어 있습니다.

MSDS 요청 드립니다.

홈페이지 제품페이지의 관련 문헌/자료 탭에서 확인 가능합니다.

DualStar™ 제품에는 probe가 포함되어 있나요?

Probe는 포함되어 있지 않으므로 별도의 주문이 필요합니다. 올리고 주문 시 reporter dye/quencher modification을 통해 주문이 가능하며, 시퀀스를 모르는 경우 design service이용도 가능합니다.

기타 궁금하신 사항은 sales@bioneer.co.kr 로 문의하여 주시기 바랍니다.

AccuPower® DualStar™ qPCR PreMix

개요

특장점

응용 및 적용

실험 자료

▶ 제품 규격/사양

▶ 실험 자료

◈ Manual

◈ MSDS

◈ Brochure

◈ Quality Assurance