PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.
AccuPower® HotStart Pfu PCR PreMix
AccuPower® HotStart Pfu PCR PreMix는 바이오니아의 enzyme-mediated HotStart 특허기술을 적용하여 반응 특이성과 PCR 증폭효율을 높인 제품으로, Pfu DNA polymerase가 낮은 온도에서 반응하면서 발생할 수 있는 mis-priming, primer-dimer와 같은 비특이 반응을 줄여줍니다. 또한 Pfu DNA polymerase는 proof-reading (3'→5' exonuclease) 기능이 있어서 DNA 증폭 반응 시 발생하는 error를 줄일 수 있어 단백질 생산을 위한 cloning 실험에 적합합니다.
특장점
- 높은 정확성
높은 정확성 (error rate= 1.9X10-6)을 가지고 있어 DNA 증폭 시 발생하는 mutation을 최소화하였습니다.
- 높은 특이도
Pfu DNA polymerase의 proof-reading 기능에 PyroHotStart 기술을 적용하여 cloning, mutagenesis 등 정확한 sequence가 요구되는 실험을 PCR Purification 정제만으로도 가능합니다.
- 편리성
Template DNA 와 primer 만을 첨가하여 PCR 반응을 누구나 손쉽게 사용할 수 있으며, Hotstart 기능으로 정확한 타겟만을 증폭 시킴으로써 Cloning 등의 실험 시 Gel extraction 하는 번거로움을 최소화 하였습니다.
- 안정성
PCR 반응 혼합액에 안정화제가 포함되어 있어 상온배송이 가능하고 solution type 제품보다 안정성 뛰어납니다.
- 재현성
ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.
응용 및 적용
• Gene cloning with blunt ends
• Site-directed mutagenesis
• High fidelity amplification
• High specificity PCR
• cDNA amplification
실험 자료
Figure. Comparison of PCR amplification efficiency between AccuPower® Hotstart Pfu PCR PreMix from Bioneer and other suppliers' PCR master mix
Target : human insulin receptor gene. The cycling conditions for AccuPower® Hotstart Pfu PCR PreMix were 95°C for 5 min, 30 cycles of 95°C for 30 sec, 55°C for 30 sec and 72°C for 2min. PCR reactions using other suppliers' PCR master mix were performed according to each supplier's protocol.
Lane M ; 100 bp DNA Ladder(Cat. No. D-1030,Bioneer)
Lane 1 ; 10 ng of human genomic DNA
Lane 2 ; 1 ng of human genomic DNA
Lane 3 ; 100 pg of human genomic DNA
Lane 4 ; 10 pg of human genomic DNA