PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.
AccuPower® Gold Multiplex PCR PreMix
AccuPower® Gold Multiplex PCR PreMix는 한 tube 내에서 한 번 반응으로 20개의 target gene의 PCR 산물을 얻을 수 있는 제품입니다. 바이오니아의 enzyme-mediated HotStart 특허기술을 적용하여 DNA polymerase가 낮은 온도에서 반응하면서 발생할 수 있는 mis-priming, primer-dimer와 같은 비특이 반응을 줄여줍니다. 본 제품은 multiplex PCR 기술을 이용한 genotyping assay나 유전자 진단 등 다양한 분야의 실험에 적합합니다.
Application Note
• Application Note_Gold Multipex PCR_Human genomic DNA and staphylococcus aureus
개요
(a) Zero cycle에서 PCR 반응 억제
PCR mixture 제조 후, pre-denaturation 온도에 도달하기 전에 비특이적 반응물이 생성되는 것을 방지하기 위해 PPi를 이용합니다.
DNA polymerase가 활성을 갖기 위해서는 Mg2+ 이온이 필요한데, mixture에 첨가되어 있는 PPi는 Mg2+ 이온과 높은 친화력을 갖기 때문에
Mg2+ 이온을 붙잡아 둠으로써 PCR 반응을 억제합니다.
(b) 변성 (Denaturation)
Mixture에 첨가되어 있는 PPase는 변성(denaturation) 단계에서 반응 온도가 올라가면 활성화되어 PPi를 Pi로 분해하여 Mg2+ 이온을 해리시킵니다.
해리된 Mg2+ 이온은 DNA polymerase에 결합하여 PCR 반응을 진행할 수 있도록 효소를 활성화 합니다.
(c) 풀림(Annealing) & 증폭(Extension)
활성화된 DNA polymerase는 PCR cycle이 진행됨에 따라 target DNA를 증폭합니다.
특장점
- Multiplex PCR
한 tube 내에서 20개의 multiplex PCR 증폭산물 생성할 수 있습니다.
- 특이성
PyroHotStart 기술을 적용하여 비특이 증폭산물 생성을 최소화하고, Pyrophosphatase 가 포함되어 있어 매 cycle 마다 생성되는 PCR inhibitor 인 pyrophosphate 를 제거해 줌으로써 PCR 효율을 극대화하였습니다.
- 편리성
PyroHotstart 기술로 Multiplexing 을 위한 PCR 조건 선정 시간을 단축시킬 수 있으며 누구나 손쉽게 Template DNA 와 여러 종류의 primer set 만을 첨가하여 한 개부터 20개까지 동시에 증폭 시킬 수 있습니다.
- 안정성
PCR 반응 혼합액에 안정화제가 포함되어 있어 상온배송이 가능하고 solution type 제품보다 안정적입니다.
- 재현성
ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.
응용 및 적용
Target | Application |
Human and Animal | |
STR analysis for determining genetic profiles in forensic cases | |
Molecular diagnostic analysis | |
Genotyping assay | |
Qualitative and semi-qualitative gene expression assay | |
Mutant screening | |
Transgenic organism analysis | |
Plant | |
STR analysis | |
Detection of pathogens/bacterial infection | |
Transgenic organism analysis | |
Qualitative and semi-qualitative gene expression assay |
실험 자료
Figure. High specificity of AccuPower® Gold Multiplex PCR PreMix
Each lane from left to right represensts the progressive number of primer sets (1 – 20) included in single AccuPower® Gold Multiplex PCR PreMix reactions.
Rxn. Condition : 95°C for 10 min, followed by 30 cycles(a), 35 cycles(b) of 30 sec at 95°C, 30 sec at 57°C, 60 sec at 72°C
M; 25/100 bp Mixed DNA Ladder (Cat. No. D-1020, Bioneer)