AccuPower® CycleScript™ RT PreMix & Master Mix

AccuPower^® CycleScript RT PreMix는 바이오니아의 특허기술인 순환 온도 역전사 반응 (CTRT, Cyclic Temperature Reverse Transcription)이 적용된 제품입니다. 순환 온도 역전사 반응은 합성 효율을 증가시킬 뿐 아니라 full-length cDNA 합성에 효과적입니다. 또한 oligo dT_²⁰, dN₆, dN₁₂ primer가 포함된 제품을 선택할 수 있으며, primer를 비롯한 cDNA 합성에 필요한 모든 구성 물질이 포함되어 있어 template RNA와 D.W.만 넣어 손쉽게 cDNA를 합성할 수 있습니다.

As low as ₩149,000

카탈로그 번호

제품 개요

특장점

유연한 반응 조건
순환 온도 역전사 반응은 저온 (15 ~ 40℃)에서 primer annealing이 진행되고 고온 (50 ~ 55℃)에서 template RNA의 2차 구조 형성을 풀어주는 2 ~ 3개 단계를 반복적으로 적용하여 기존의 42℃ 역전사 반응보다 높은 효율로 cDNA를 합성할 수 있습니다. 순환 온도 역전사 반응과 더불어 22 ~ 55°C 내의 단일 온도에서 역전사 반응도 가능합니다.
안정성
안정화 물질이 포함된 건조 제품으로 RTase의 열안정성 증가로 55℃까지 역전사 반응이 가능합니다.
Controllable Reaction Time
반응시간은 증폭하려는 유전자의 copy 수와 크기에 따라 달라질 수 있습니다. High copy gene의 경우, 10분의 역전사 반응으로도 충분한 양의 cDNA를 합성할 수 있습니다.
재현성
ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.
편리성
Primer를 비롯한 cDNA 합성에 필요한 모든 구성 물질이 포함되어 있어, 증폭하고자 하는 RNA와 D.W.만을 첨가하여 바로 RT 반응을 수행할 수 있습니다.

응용 및 적용

• Sequencing single and double-strand DNA or RNA

• Random priming reaction

• cDNA library construction

• Probe labeling

• mRNA 5'-end mapping by primer extension analysis

• PCR

• Real-time PCR

실험 자료

Figure. Reaction conditions of Cyclic RT compared with that of conventional RT.
The conventional fixed temperature RT reactions at 42°C and 55°C and cyclic RT reactions at 37°C and 50°C using HeLa cell total RNA (800 ng each) were performed 800 bp, 1.5 kb, 2.0 kb, and 2.6 kb fragments of human transferrin receptor gene were amplified with each primers. AccuPower^® CycleScript RT Premix series (dT20 & dN12) preferably shows good results at cyclic RT reaction condition.

제품 규격/사양

▶ 제품 규격/사양

DNase activity	No
RNase activity	No
Fragment size	Up to 9 kb

▶ 실험 자료

Figure 1. Amplification Results of AccuPower^® CycleScript RT Premix series (dT20 & dN12) using Coxsaekie virus A9 (AJ295200) 5'-UTR region compared with other companies.
RT reactions were performed according to manufacturer's recommendation with Coxaekie virus RNA. PCR reactions were performed AccuPower^®PCR PreMix (K-2012) from Bioneer.

1; AccuPower RT Premix RT reacted with dT primer
2; AccuPower RT Premix RT reacted with random primer
3,4; AccuPower CycleScript RT PreMix (dT20)
5,6; AccuPower CycleScript RT PreMix (dN12)
7,8; AccuPower CycleScript RT PreMix (dT20)
9,10; AccuPower CycleScript RT PreMix (dN12)
11,12; AccuPower CycleScript RT PreMix (dT20)
13,14; AccuPower CycleScript RT PreMix (dN12)
15,16; C company's RT product with dT primer RT
17,18; C company's RT product with random primer RT
19,20; I company's RT product with dT primer RT
21,22; I company's RT product with random primer RT
M; 100 bp ladder (Cat. No.: D-1030)

Figure 2. Synthesis test of long transcript compared with other companies.
Bioneer's AccuPower^® CycleScript RT PreMix 1 and 2 were incubated for 1 hr, at 55°C, C company's RT Product 3 and 4 were for 1 hr, at 42°C, I company's RT product 5 and 6 were for 1 hr, at 45°C. And then 95°C 5 min with HeLa cell total RNA. RT reaction condition is performed according to each manufacturer's recommendation.

M; 100 bp ladder (Cat. No.: D-1030) 1, 3, 5; RT product included dT Primer
2, 4, 6; RT product included random primer

Figure 3. Gene amplification test of transferrin receptor compared with other companies.
The reaction condition was performed according to each manufacturer's recommendation. All cDNAs were reacted with AccuPower^® PCR PreMix (K-2012) from Bioneer

1~ 5; AccuPower^® CycleScript RT PreMix (dT20) incubated at 55°C for 1 hr
6~10; AccuPower^® CycleScript RT PreMix (dN12) incubated at 55°C for 1 hr
11~15; C company's RT product including dT primer incubated at 42°C for 1 hr
16~20; C company's RT product including random primer incubated at 42°C for 1 hr
21~25; I company's RT product including dT primer incubated at 45°C for 1 hr
26~30; I company's RT product including random primer incubated at 45°C for 1 hr
M; 1 kb ladder (Cat. No.: D-1040)

Figure 4. RT reaction at various temperature and short reaction time
Reverse transcription condition: conventional 42°C 1 hr, 55°C 1 hr & Cyclic reaction 1: (37°C 2 min/50°C 3 min) X 12, Cyclic reaction 2 : (37°C 1 min/ 47°C 3 min/55°C1 min) X 12.
This product shows thermal stability.

Primer set : human GAPDH primer set, human β-actin primer set M: 100 bp ladder (D-1030)
1,5,9,13,17,21,25,29; HeLa cell total RNA 100 ng 2,6,10,14,18,22,26,30; HeLa cell total RNA 10 ng
3,7,11,15,19,23,27,31; HeLa cell total RNA 1 ng 4,8,12,16,20,24,28,32; HeLa cell total RNA 100 pg

Figure 5. AccuPower^® CycleScript RT Premix (dT20) was performed cyclic reverse transcription according to (37°C 2 min/50°C 3 min) ; X12, X4, X2 cycles. 10min reaction is enough. HeLa cell total RNA templates are serial dilution such as 100 ng, 10 ng, 1 ng, 100 pg.

◈ Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.

• ISO 9001 - certificate

• ISO 13485 - certificate

주문 정보

카탈로그 번호	제품명	규격				가격
K-2046	AccuPower^® CycleScript™ RT PreMix & Master Mix	PreMix type	0.2 ml thin-wall 8-strip tubes with attached cap / 96 tubes	20 µl reaction	dN6	₩K-2046
K-2045					dN12	₩K-2045
K-2044					dT20	₩K-2044
K-2049				50 µl reaction	dN6	₩K-2049
K-2048					dN12	₩K-2048
K-2047					dT20	₩K-2047
K-2046-B			0.2 ml thin-wall 8-strip tubes with attached cap / 480 tubes	20 µl reaction	dN6	₩K-2046-B
K-2045-B					dN12	₩K-2045-B
K-2044-B					dT20	₩K-2044-B
K-2049-B				50 µl reaction	dN6	₩K-2049-B
K-2048-B					dN12	₩K-2048-B
K-2047-B					dT20	₩K-2047-B
K-2050-2			0.5 ml thin-wall tubes with attached cap / 100 tubes	50 µl reaction	dN6	₩K-2050-2
K-2050-1					dN12	₩K-2050-1
K-2050					dT20	₩K-2050
K-2051*		MasterMix type	1 ml of 2X Master mix solution			₩K-2051

*MasterMix 제품의 경우, Primer(dT20&dN6)는 별도의 튜브에 제공됩니다.

자주 묻는 질문들

PreMix와 Master Mix 제품의 차이점은 무엇인가요?

PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.

PreMix의 사용법/ PreMix 시약 볼륨은 어떻게 맞추면 되나요?

건조된 시약의 부피는 고려하지 않아도 되며, template, primer, nuclease-free water만으로 최종 reaction volume을 맞춰주면 됩니다.

Tracking dye 포함제품과 미포함제품 모두 주문 가능한가요?

동일한 제품이라도 Cat. No에 따라 tracking dye 포함 제품과 미포함 제품으로 나누어집니다. -dye제품에 대한 Cat. No가 없다면, custom제작이 가능하나 수령하기까지 1~2주 정도의 시간이 소요될 수 있습니다. RT제품군은 일부 제품을 제외하고 dye가 포함되어 있지 않습니다. Tracking dye 포함 제품은 전기 영동 시 별도의 loading dye를 섞어주지 않아도 된다는 이점이 있습니다. (* RT제품 중 dye가 포함된 경우 cDNA 합성 후에 PCR 진행 시 10% v/v로 사용할 경우 문제가 되지 않으나 그 이상 사용할 경우 PCR에 영향을 줄 수 있습니다).

Master Mix의 사용법

2X Master Mix로 제공되며 최종 reaction volume의 1/2만큼 사용하면 됩니다. 반응수(tests)는 reaction volume을 얼마로 사용하는지에 따라서 달라집니다.

PreMix제품의 반응수(tests)와 제공량(volume)

PreMix는 96 tests와 480 tests 제품이 있으며, 제품에 따라 20 μl, 50 μl reaction volume으로 판매되고 있습니다.

RT primer로 사용되는 oligo dT (dT20)와 random primer (dN6, dN12)의 차이점은 무엇인가요?

dT₂₀ : poly A tail에 binding하며, mRNA를 cDNA로 합성하고자 할 때 사용됩니다.
dN₆ : RNA의 아무 부위에 무작위적으로 binding하므로 poly A tail이 짧거나 없는 bacteria나 total RNA를 이용한 cDNA합성시 사용됩니다.
dN₁₂ : dN₆보다 길이가 2배 길어 annealing 온도를 높여야 할 때 주로 선택하지만 binding 효율은 떨어집니다.

Oligo dT 나 random primer가 포함된 RT제품군에는 어떤 것들이 있나요?

AccuPower^® CycleScript™ RT PreMix & Master Mix, AccuPower^® RocketScript™ Cycle RT PreMix & Master Mix, AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix (RNase H Minus)제품은 oligo dT 혹은 random primer가 포함되어 있습니다. Master Mix 제품의 경우 oligo는 별도의 tube로 제공됩니다. (AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix (RNase H Minus) 제품 중 0.2 ml/480T는 dT₂₀만 제공되며, 자세한 사항은 제품페이지의 주문 정보탭에서 확인 가능합니다.)

Oligo dT, random primer는 별도 구매가 가능한가요?

구매 가능합니다.

10X Reaction buffer는 별도 구매가 가능한가요?

구매 불가능합니다.

RT kit 제품 종류를 알고 싶습니다.

AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus는 Thermostable 제품으로 RNA의 복잡한 2차 구조를 풀어주어 cDNA합성 효율을 높여주고, RNase H의 활성을 제거함으로써 보다 길이가 긴 cDNA 합성(최대 12.5 kb)이 가능합니다.
AccuPower^®CycleScript™ RT PreMix & Master Mix는 자사 특허 기술인 CTRT (Cyclic Temperature Reverse Transcription)이 적용되어 cDNA합성 효율이 높고, Oligo가 포함된 제품으로 RT제품군 중 가장 판매량이 높습니다.

RT와 RT-PCR의 차이점은 무엇인가요?

실험방법에 차이가 있습니다. RT는 cDNA만 합성하는 방법이며(two-step 과정 중 한 단계), RT-PCR은 RNA를 template로 하여 cDNA 합성부터 PCR까지 one-step으로 이어서 진행하는 방법입니다.

RT-PCR 제품 종류를 알고 싶습니다.

RT-PCR 제품 종류는 매우 다양하며, 사용 목적에 따라 다음과 같이 구분할 수 있습니다.

Standard RT-PCR : AccuPower^®RT-PCR PreMix & Master Mix
Multiplex : AccuPower^®RocketPlex RT-PCR PreMix & Master Mix
High sensitivity (Thermostable) : AccuPower^®RocketScript™ RT-PCR PreMix & Master Mix
Long & High efficiency : AccuPower^®RocketScript™ RT-PCR PreMix & Master Mix, RNase H Minus
Low copy RNA detection : AccuPower^®Dual-Hotstart™ RT-PCR PreMix
False positive free : AccuPower^®Dual-HotStart RT-PCR PreMix(with UDG)

제품의 유효기간 확인 방법

일반적으로 PreMix의 유효기간은 -20°C 조건에서 2년, Master Mix의 유효기간은 1년 정도이며, 제품상자의 모래시계 옆 사용기한이 표시되어 있습니다.

miRNA RT가 가능한 제품이 있나요?

miRNA용 primer를 별도로 주문하여 자사 RT제품으로 사용 가능합니다.

CTRT1와 CTRT2의 차이점은 무엇인가요?

둘 다 RNA 2차 구조에 의해 cDNA 합성이 잘 되지 않을 경우 사용하는 방법입니다. CTRT1를 우선 권장 드리며 농도가 낮거나 CTRT1으로 잘 안될 경우에는 CTRT2 방법으로 진행하면 됩니다. CTRT 방법으로도 해결이 되지 않는다면 thermostable 기반의 RocketScript™ 제품을 권장합니다.

cDNA는 어떻게 정량 할 수 있나요?

cDNA 합성 후 product에는 cDNA뿐만 아니라 시약에 포함된 enzyme, dNTP, salt 등이 남아있어 정확한 농도와 순도가 확인이 불가능합니다. 확인하고 싶다면 정제과정을 거쳐야 합니다. 일반적으로 RT 시약에 문제가 없고 실험이 정확하게 진행됐을 경우에는 사용한 RNA의 양과 1:1비율로 cDNA가 합성되며 정제 없이 다음 PCR step을 진행해도 별다른 영향을 미치지 않습니다.

COA 요청

qc@bioneer.co.kr 메일로 구매하신 제품의 Cat. No.와 Lot. No.를 기재하여 보내주시면 메일로 회신해드립니다.

MSDS 요청 드립니다.

홈페이지 제품페이지의 관련 문헌/자료 탭에서 확인 가능합니다.

RT진행 시 RNA는 얼만큼 사용하면 되나요?

매우 적은 양의 RNA도 cDNA로 전환이 가능합니다.일반적으로 사용되는 방법에 따라 1μg의 RNA를 사용하여 cDNA로 합성해서 serial dilution을 통해 테스트 후 적정 사용량을 잡을 것을 권장합니다.

PCR진행 후 dye포함 여부에 따른 전기 영동 방법을 알고 싶습니다.

Tracking dye 포함 제품은 바로 loading이 가능하며, 미포함 제품은 loading dye를 추가해서 loading해야 합니다.

RT이후 cDNA의 농도 및 퀄리티는 어떻게 확인할 수 있나요?

RT mixture에 포함된 enzyme, dNTP등으로 인해 agarose gel, nano-drop 측정법은 정확하지 않습니다. 따라서 PCR/qPCR을 통해서 확인해야 하며, cDNA mixture 원액을 template로 사용할 경우 PCR reaction volume의 최대 10% 사용을 권장합니다. 그 이상을 사용할 경우 mixture 구성물질로 인해 PCR inhibition이 있을 수 있습니다.

RNase H가 무엇인가요?

RNase H는 DNA-RNA 혼성 가닥에서 RNA를 분해하는 효소입니다. RNase 활성이 너무 강하면 cDNA를 합성하는 동안 RNA를 제거하여 길이가 긴 product 합성을 저해할 수 있습니다.

RT-PCR제품 사용하여 RT만 진행하는 것도 가능한가요?

One-step으로 모든 조성이 최적화되어 있으므로 two-step으로 진행 시 효율이 좋지 않을 수 있습니다. Oligo와 template RNA를 넣어서 반응은 가능하나 RT전용 키트보다 효율이 떨어질 수 있기에 개별 제품 구매를 권장합니다.

바이러스의 RNA를 사용한 RT에 적합한 제품을 알고 싶습니다.

바이러스 RNA의 경우, 양이 적기 때문에 RNase H Minus제품군을 추천 드립니다(AccuPower^®RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus).

기타 궁금하신 사항은 sales@bioneer.co.kr 로 문의하여 주시기 바랍니다.

AccuPower® CycleScript™ RT PreMix & Master Mix

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응용 및 적용

실험 자료

▶ 제품 규격/사양

▶ 실험 자료

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