AccuTool™ gRNA & Cas9 protein (RNP)

Active RNA-Guided Endonuclease (aRGEN)은 CRISPR/Cas9 시스템을 기반으로 한 차세대 nuclease로, 유전자 편집을 위한 혁신적인 도구입니다.
aRGEN은 Cas9 nuclease와 gRNA로 구성되며, target 서열(19~20 bp)과 PAM 서열(5’-NGG-3’)을 인식합니다.
이러한 특성으로 실험자들은 aRGEN을 통해 유전체의 모든 영역을 손쉽게 편집할 수 있습니다.
추가적으로, target 서열의 특이적인 절단을 통해 in vitro와 in vivo에서 유전자 편집(knock-in/knock-out/locus deletion)을 효율적으로 수행할 수 있습니다.

gRNA와 Cas9 protein의 RNP complex

서열 특이적인 gRNA와 Cas9 단백질은 안정적인 ribonucleoprotein (RNP) 복합체를 형성하여 in vitro와 in vivo 모두에서 target 서열에 작동 가능한 nuclease가 됩니다.
이 RNP 복합체는 primary cell과 같이 transfection이 어려운 세포에 사용될 수 있고, transfection 이후 세포 내 잔여 시간이 짧아 off-target 효과를 최소화할 수 있습니다.
AccuTool ™ gRNA & Cas9 protein (RNP) 서비스는 target 세포에 유전자 편집을 적용할 수 있는 매우 효율적이고 구체적인 방법을 제공합니다.

• aRGEN-Lyophilized sgRNA 서비스
  Active RGENs, aRGEN 합성 서비스는 고객이 원하는 gRNA 서열을 합성하여 제공하는 Custom aRGEN 합성 서비스와 EGFP, CCR5, HPRT1 유전자를 효율적으로 target한 sgRNA Positive Control 제품이 있습니다. (Positive control gene organism : Homo sapiens)
  제품은 Ready-to-Injection이 가능한 동결건조 된 gRNA 형태로 제공됩니다.
• Recombinant Cas9 protein Selection Guide (Figure 1)
  재조합 Cas9 단백질은 solution 형태로 제공됩니다.
  
  

  Cas9 WT Protein	가장 일반적으로 사용되는 Cas9 nuclease로, Streptococcus pyogenes에서 유래하였으며, site에 특이적으로 DSB를 일으키는 RNA-guided nuclease입니다.
  Nickase (D10A) Cas9 Protein	Cas9에 D10A point mutation을 도입한 것으로, single strand DNA nicks을 일으킬 수 있습니다. Paired Cas9 Nickase는 DNA의 각 strand에 하나씩 두 개의 single strand nicks을 생성하여 target 서열에 DSB를 일으킵니다. 각각의 잘린 말단에 blunt ends 대신 긴 overhangs이 형성되어 유전자 integration 및 insertion을 더 효과적으로 제어할 수 있습니다.
  Dead (D10A/H840A) Cas9 Protein	Cas9에 D10A 및 H840A point mutations를 도입한 것으로, 이 단백질은 endonuclease 활성은 없지만 target 서열에 결합하는 특성은 그대로 가지고 있습니다. 이러한 특성을 활용하여 해당 단백질에 유전자의 과 발현 혹은 억제를 유도하는 단백질들을 결합시켜 특정 유전자 발현 조절 실험에 적용할 수 있습니다.
  Sniper Cas9 Protein	SpCas9의 variants로, off-target 효과를 줄이고, on-target 효과가 우수한 특징을 가지고 있습니다. (high-specificity, low off-target)

  

  

  Figure 1. Recombinant Cas9 protein

• gRNA-Cas9 protein RNP complex (Figure 2.)
  
  

  gRNA-Cas9 protein RNP complex

  Transfection이 어려운 target 세포에 electroporation을 통해 전달이 가능합니다. - Cas9과 gRNA 발현을 위한 전사나 번역 과정이 필요 없으므로 빠르게 유전자 편집이 가능합니다. - 핵으로 전달되는 transfection 방법인 nucleofection 또는 microinjection을 선택할 때 유리합니다. - Cell-type specific promoter activity와 무관합니다. - Host genome 내에 무작위적으로 삽입될 위험이 없습니다.

Figure 2. gRNA-Cas9 protein RNP complex

특장점

• 높은 Knock-out 효율
  

  Plasmid form 대비 높은 효율과 낮은 toxicity를 갖습니다.
  세포 내 잔여 시간이 짧아 off-target 발생 확률이 낮습니다.
  Positive control sgRNA의 경우, 90% 이상의 Knock-out 효율을 갖습니다.

• 간단하고 쉬운 방법
  

  별도의 prep 과정 없이 세포에 바로 적용 가능합니다.
  Embryo injection을 통해 KO animals production이 가능합니다.

• 합리적인 가격 & 빠른 배송
  

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