ExiProgen™ EC-Bulk Protein Synthesis Kit

10 kDa - 150 kDa 사이의 단백질의 합성이 가능합니다.
그 외 범위의 단백질도 합성이 될 수 있지만 보증하지 않습니다.
(참고로, 키트에 포함되어 있는 Bulk SECF device의 cut off size는 6~8 kDa입니다. 따라서 10 kDa 이하의 단백질은 발현 및 정제과정에서 소실될 수 있습니다.)

단백질 발현 및 정제는 각각의 프로토콜로 운용됩니다.
프로토콜은 "단백질 발현-No.906 (Bulk_Expression, 약 25시간 소요)"과 "단백질 정제-No.907 (Bulk_Purification, 약 15시간 소요)으로 구성되어 있습니다.
예시) 다음과 같이 스케줄을 정하여 실험하시면 보다 효율적으로 진행할 수 있습니다.
(월) 오후 3~4시: 단백질 발현 → (화) 오후 4~5시: 발현 시료 회수 및 단백질 정제 → (수) 오전 9시: 정제된 단백질 회수

Template DNA는 공통적으로 아래 그림과 같이 [T7 promoter-RBS-Target gene(with His-tag)-T7 terminator]의 구조를 가지고 있어야 하며, Plasmid DNA와 PCR product를 모두 사용할 수 있습니다. 

1) Plasmid DNA type
자사의 in vitro translation 전용 vector인 pBIVT vector (Cat. No. K-7350, Bioneer) 에 cloning하여 사용하는 것을 추천 드립니다.
그 외에 위의 구조를 가지고 있는 발현 vector (ex)pET series)도 사용할 수 있습니다.

2) PCR product type
a. 유전자가 비발현용 vector (ex) T-vector) 또는 genomic DNA 상태로 있는 경우
:자사의 ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit (Cat. No. K-7400, Bioneer)를 사용하면 cloning 과정 없이 단백질 발현용 template를 제작할 수 있습니다.
b. 유전자가 발현용 vector에 있으나, 증량이 필요한 경우
: 자사의 2F/2R Primer set (Cat. No. K-7400, Bioneer)와 AccuPower^® ProFi Taq PCR PreMix (Cat. No. K-2633, Bioneer)를 이용하여 쉽게 증량하여 사용할 수 있습니다.

단, 단백질의 크기가 큰 경우 (>50kDa)에는 PCR product보다 Plasmid DNA를 사용하는 것을 권장합니다.
또한 Template DNA의 A_260/280 : 1.7~2.0, A_260/230 : >1.5의 순도로 준비하여 사용하시기를 권장합니다.

자사의 단백질 합성 키트는 E. coli 기반 발현 시스템이기 때문에 E. coli-based codon optimization을 하시길 권장드리며, codon optimized sequences를 가지는 시료의 경우 단백질의 발현양이 다소 높아질 수 있습니다.

단백질을 최대로 얻기 위해서는 최적의 template DNA 사용량을 찾는 것이 중요합니다. 따라서 본 키트를 사용하기 전에 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit (K-7300~02)를 사용하여 DNA 사용량에 따른 합성 스크리닝 실험을 진행하시기를 권장합니다.